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既要充分保留被测核酸,(特别是RNA)不被降解,又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。
步骤:基本与免1疫组织化学技术相似,即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经RNA酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳,40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃超低温冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存数月之久。
意义
免yi组织化学的临床应用主要包括以下几方面:
(1)的诊断与鉴别诊断;
(2)确定转移性的原发部位;
(3)对某类进行进一步的病理分型;
(4)软组织的一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行组化研究对软组织的诊断是不可缺少的;
(5)发现微小转移灶,RNA原位杂交技术服务,有助于临床方案的确定,包括手术范围的确定。
(6)为临床提供方案的选择。
点对点酵母双杂交验证实验流程
1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;
2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey)、阳性对照质粒(pGBKT7-p53/pGADT7-T)、阴性对照质粒(pGBKT7-Lam/pGADT7-T)分别共转到Y2H Gold感受态细胞中,涂布于DDO平板培养;
3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证;
4、实验数据与报告整理。